Diplômée de Sciences Po et de l'INALCO (institut national des langues et des cultures orientales) où elle y a étudié le chinois, elle effectue la plus grande partie de sa carrière au sein du ministère des affaires étrangères après avoir y avoir été reçue au concours en 1986.
Conseillère d'Alain Juppé de 1993 à 1995, elle devient ensuite secrétaire d'ambassade en Indonésie avant de rejoindre l'ambassade de France à Washington en 2002 comme porte-parole et chef du service de presse. Elle occupe ce poste pendant cinq ans, au cours de la période difficile de l'après 11 Septembre. En 2007, elle devient la sous-directrice de l'Afrique du Nord au ministère des Affaires Étrangères avant d'être nommée directrice adjointe en 2008.
En 2012, elle prend la direction de l'École nationale d'administration (ENA) où elle oeuvre pour réformer la formation qui y est dispensée et diversifier le recrutement. Elle occupera ce poste jusqu'à sa nomination au gouvernement d'Édouard Philippe en juin 2017. En mars 2019, investie à la tête de la liste La République en Marche pour les élections européennes, elle démissionne du gouvernement. La liste arrive en deuxième position le 26 mai 2019, avec 22,41 % des suffrages et 21 élus. Deux semaines plus tard, Nathalie Loiseau renonce à la présidence du groupe centriste au Parlement européen.
En 2014, elle a publée un livre " Choisissez TOUT " aux Éditions J.C Lattès, dans lequel elle raconte son histoire et incite les femmes à vivre pleinement leurs vies.
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Nathalie Loiseau est favorable à l'accueil d'Edward Snowden en France
Alors que le lanceur d'alterte Edward Snowden a demandé à Emmanuel Macron l'asile en France, la député européenne Nathalie Loiseau s'est exprimée sur France Inter en sa faveur le 16 septembre dernier, saluant "quelqu'un qui a rendu service à l'humanité" : "(Il) a montré, preuves à l'appui, qu'il y avait un système de surveillance extraordinairement vaste." Mais de rappeler : "Ce n'est pas le président de la République qui donne l'asile en France, c'est (...) l'OFPRA (Office de protection des réfugiés)."
Nathalie Loiseau au meeting Renaissance LREM à Cergy, le 16 mai 2019.
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